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      新聞詳情

      ELISA 實驗各類組織勻漿處理

      日期:2022-08-11 03:36
      瀏覽次數:40
      摘要: ELISA 實驗中各類組織勻漿(不易勻漿的組織)的采集、處理和保存;(需要測蛋白濃度) 1、采集組織,在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,稱重,剔除附屬的結締組織,稱取組織塊。 2、用移液管量取 0.1M PBS 或者用 0.86%冷生理鹽水,勻漿介質或生理鹽水的體積總量應該是組織塊重量的 9 倍,用眼科小剪盡快剪碎組織塊(天然時操作要在冰水浴中進行,將盛有組織 的小燒杯放入冰水中)。 3、勻漿的方式有多種: a)手工勻漿:將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中,再將剩余的 1/3 勻漿介質或生理鹽水...

      ELISA 實驗中各類組織勻漿(不易勻漿的組織)的采集、處理和保存;(需要測蛋白濃度)

      1、采集組織,在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,稱重,剔除附屬的結締組織,稱取組織塊。

      2、用移液管量取 0.1M PBS 或者用 0.86%冷生理鹽水,勻漿介質或生理鹽水的體積總量應該是組織塊重量的 9 倍,用眼科小剪盡快剪碎組織塊(天然時操作要在冰水浴中進行,將盛有組織 的小燒杯放入冰水中)。

      3、勻漿的方式有多種:

      a)手工勻漿:將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中,再將剩余的 1/3 勻漿介質或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊,一起倒入勻漿管中進行勻漿,左手持勻漿管將下 端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉動研磨數十次(6~8 分鐘),充分研碎,使組織勻漿化。

      b)機器勻漿:用組織搗碎機 10000~15000r/min 上下研磨制成 10%組織勻漿,也可用內切式組織勻漿機制備(勻漿時間 10 秒/次,間隙 30 秒,連續 3~5 次,在冰水中進行),皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時間。

      c) 超聲粉碎:用超聲粉碎機進行粉碎,可用 Soniprep150 型超聲波發生器以振幅 14 微米超聲處理 30 秒使細胞破碎,也可用國產超聲波發生儀,用 40 安培,5 秒/次,間隙 10 秒反復 3~5 次。

      4、將制備好的 10%勻漿用離心機 4℃,3000rpm 離心 15min,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉淀。

      5、取上清。 分裝凍存備用,

      2-8℃下,可放置保存 24-48 小時;

      -20℃下,可放置保存 1 個月;

      -70℃下,可放置保存 6 個月;

      6、根據你的實驗需要,取適量上清夜進行各種 ELISA 測定。

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